پاورپوینت کروماتوگرافی و الکتروفورز (pptx) 28 اسلاید
دسته بندی : پاورپوینت
نوع فایل : PowerPoint (.pptx) ( قابل ویرایش و آماده پرینت )
تعداد اسلاید: 28 اسلاید
قسمتی از متن PowerPoint (.pptx) :
کروماتوگرافی و الکتروفورز
کلیات و تعاریف
1
کروماتوگرافی
کروماتوگرافی طبق تعریف آیوپاک (1993):
کروماتوگرافی روشی فیزیکی برای جداسازی است که در آن اجزایی که باید از هم جدا شوند، بین دو فاز توزیع میشوند که یکی از آنها ثابت بوده در حالی که دیگری در جهتی مشخص حرکت میکند.
در نتیجه طراحی پایه برای هر جداسازی کروماتوگرافی به شرح زیر خواهد بود:
2
طراحی کروماتوگرافی
جداسازی کروماتوگرافیک از یک فاز ساکن تثبیت شده که بر روی آن یک فاز حامل متحرک جریان دارد تشکیل شده است. مولکولهای حل شونده میتوانند بین فازهای ساکن و متحرک جابهجا شوند (مانند یک تسمه نقاله).
3
اصول کروماتوگرافی
مولکولی را در نظر میگیریم که در فاز مایع حل شده و بر روی فاز ساکن در حال جریان باشد.
اگر حلال (فاز مایع) با سرعت vs، جریان داشته باشد، آنگاه مولکول حل شونده با همان سرعت به پیش برده میشود.
اما اگر حلال (فاز متحرک) در فاز ساکن توزیع شود و یا به آن بچسبد، آنگاه برای کسری از زمان که در فاز جامد میگذراند، ساکن خواهد ماند.
در نتیجه با جابهجایی مولکول بین دو فاز، سرعت شارش با توجه به زمانی که در فاز ساکن میگذراند کاهش مییابد.
4
کمیسازی کروماتوگرافی
وضعیت مانند قدم گذاشتن بر و یا پیاده شدن از یک تسمه نقاله در حال حرکت است. سرعت سفر واقعی متناسب با کسر زمانی است که بر روی تسمه در حال حرکت صرف میشود.
این پدیده را میتوان با استفاده از ایدههایی از تعادل فاز مانند استخراج حلال و یا روشهای جداسازی فاز مورد استفاده در شیمی سنتزی کمیسازی کرد.
ضریب توزیع، K، به صورت زیر تعریف میشود:
5
کمیسازی کروماتوگرافی (ادامه)
در این معادله پویا، کسر زمانی که مولکول در فاز متحرک میگذراند برابر (K + 1) / K خواهد بود. در نتیجه سرعت واقعی شارش مولکول حلشونده برابر خواهد بود با:
بنابراین مولکولهای متفاوت، با ضرایب توزیع متفاوت، با سرعتهای متفاوت به نسبت جبهه حلال، جریان (شارش) مییابند. این پدیده اساس جداسازی است.
6
آزمایش کروماتوگرافی
کروماتوگرافی را میتوان بر روی موارد زیر انجام داد:
صفحات نازک کروماتوگرافی کاغذی یا لایه نازک
که در آن صفحات برای نشان دادن مکان نسبی ترکیبات جدا لکهگذاری میشوند.
یا، امروزه غالبا در مورد بیومولکولها ماده کروماتوگرافی درون ستونی که فاز مایع از میان آن شارش مییابد، بستهبندی میشود. مولکولهای جداشده به هنگام خروج (یا شسته شدن) از ستون آشکارسازی میشوند.
7
انواع کروماتوگرافی
در کروماتوگرافی لایه نازک یا کاغذی، کاغذ جاذب یا لایه سیلیکای ریز، هم به عنوان بستر و هم به عنوان فاز ساکن عمل میکند. علاوه بر این حلال ساکن را نیز به هنگام عبور حجم اعظم حلال به دام میاندازد.
در کروماتوگرافی گازی، فاز ساکن معمولا لایه نازکی از روغن در سطح داخلی یک لوله موئینه بلند است که از میان آن یک گاز حامل بی اثر (فاز متحرک)، حاوی مولکولهای نمونه فرار، جریان مییابد.
8
کروماتوگرافی مایع
در ادامه به بررسی روشهای مختلفی از کروماتوگرافی مایع که در جداسازی و آنالیز ماکرومولکولهای زیستی کاربرد دارند میپردازیم.
چنین سامانههایی غالبا از فشارهای بالا و سرعتهای شارش سریع بهره میبرند و به آنها (با اغماض)، کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا (HPLC) یا کروماتوگرافی مایع پروتئین سریع (FPLC) گفته میشود.
9
